渗透、杀菌双管齐下
高金噻酮（三代）是我新乡高金药业有限公司会同台湾总部科研人员，在高金噻酮（一代）的基础上研制的第三代新型高效渗透剂。物点表现在新型环保，高效渗透，无毒杀菌，双亲型促渗剂，已有的研究结果用应用实践证明，高金噻酮（三代）不仅具有高金噻酮（一代）的强大的渗透效力，并且对抑制植物病原真菌孢子萌发具有明显的作用。
通过实验，高金噻酮（三代）对植物病原真菌分生孢子、孢子囊、菌核等无性繁殖体萌发均有不同程度的抑制作用，特别针对黄瓜霜霉病、马铃薯晚疫病、黄瓜黑星病、稻瘟病、苹果斑点落叶病等病害。不言而喻，抑制病原真菌分生孢子（或孢子囊、菌核）萌发，将在很大程度上控制病害的发生与流行。
有关权威专家评论，高金噻酮（三代）属于环保实力型渗透剂，渗透、杀菌双管齐下。从提高杀菌剂渗透性角度解释，本品极大的提高了杀菌剂对植物叶表组织的渗透力，使药剂迅速穿过细胞壁，预防病菌原的侵入或杀灭已侵入的病原菌，达到保护植物的目的。可与任何杀菌剂混用或混配并提高其防治效果。从抑制病原菌孢子萌发角度解释，本品对多种植物病原真菌孢子都有某种程度的抑制作用，可与各种杀菌剂特别是广谱性杀菌剂混配，将大幅度提高对病害的防治效果。
高金噻酮（三代）对若干种植物病原真菌孢子萌发的抑制作用
“高金噻酮”（三代）是新乡高金药业有限公司研制开发的新型、高效、无毒、双亲型促渗剂。已有的研究结果及应用实践证明，本品与各种农药，包括杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂混用，可明显增强对病、虫、草害的防治效果并减少农药使用量。可南省农科院植保所研究表明，50%多菌灵可湿性粉剂加入1.5%高金噻酮与多菌灵单剂比较，对大叶黄杨白粉病的防治效果可提高1.5倍。一般认为，高金噻酮的增效原理可解释为，本品极大提高了杀菌剂对植物叶表组织的渗透力，使药剂迅速穿过细胞壁，预防病原菌的侵入或杀灭已侵入的病原菌，达到保护植物的目的。本研究通过离体（in vitro）试验发现，高金噻酮（三代）对黄瓜霜毒病（pseudoperonospora cubensis）、马铃薯晚疫病（phytophthora infestans）等数种植物病原真菌孢子萌发具有明显的抑制作用。这一结果为高金噻酮（三代）与杀菌剂复配增效原理提供了新证据，也为高金噻酮（三代）与何种杀菌剂复配防治何种病害更有效提供了生物学信息。试验结果报告如下：
1. 材料与方法
1.1供试药剂
高金噻酮(三代)有效成份含量99.9%新乡高金药业有限公司提供
1.2供试菌种
黄瓜霜霉病 pseudoperonospora cubensis
马铃薯晚疫病 phyrophthora infestans
黄瓜黑心病 cladosporium cucumerinum
水稻稻瘟病 phyricularia oryzae
苹果斑点落叶病 alternaria mali
梨黑斑病 alternaria kikuchiana
番茄早疫病 alternaria solani
番茄叶霉病 cladosporium fulvam
水稻纹枯病 pellicularia sasakii
油菜菌核病 sclerotinia sclerotiorum
上述菌种除黄瓜霜霉田间采集外,其余均为南开大学元素有机化学研究所保存菌.
1.3供试菌孢子独得法、孢子悬浮液配制及萌发试验法
1.31黄瓜霜霉病:田间采集新鲜病叶,清水卫洗后保存于20℃,相对湿润度100%条件下,24小时后叶背即可产生黑色霉层(孢子囊),用湿毛笔将孢子囊刷至蒸馏水中,玻璃纤维过滤,制成低倍镜下(10×15)每视野30-50个孢子囊悬浮液.采用“载玻璃片悬滴法”进行孢子萌发试验。具体操作过程是，将孢子囊悬浮液分别滴加在载玻片上，置于20℃、相对湿度100%条件下，24小时发镜检孢子囊萌发率。孢子囊内含物全空或部分空判断为萌发，孢子囊充满内含物保持处理状态视为不萌发。
1.32马铃薯晚疫病：将供试菌接种于v-8培养基平板，20℃黑暗培养二周即可形成孢子囊，用湿毛笔将孢子囊刷至蒸馏水中，玻璃纤维过滤，制成低倍镜下（10×15）每视野30-50个孢子囊悬浮液。采用与黄瓜霜霉病相同的方法进行孢子萌发试验.
1.33水稻稻瘟病:将供试菌接种于燕麦培养基平板,25℃黑暗培养7-10天,自来水冲洗除去*生菌丝,blb灯下照射48小时即可产生分生孢子.孢子悬浮液的配制及孢子萌发试验法与马铃薯晚疫病相同.但镜*时间为处理后12小时,孢子萌发判断标准;当芽管长度大于孢子短茎1/2时视为萌发.
1.34水稻稻瘟病：将供试验菌接种于psa培养基平板,25℃黑暗培养一周,自来水冲洗耳恭听除去气生菌丝，blb灯下照射48小时即可产生分生孢子。孢子悬浮液的配制及孢子萌发试验法均与水稻稻瘟病相同。
1.35苹果斑点勤务员叶病、番茄早疫病、梨黑斑病：将供试验菌接种于psa培养基平板,25℃黑暗培养一周,用直径4mm打孔器打取5枚菌*，置于20ml灭菌水中，混合器振动1分钟，取其0.1ml置于psa平板内，用三角玻璃刮刀将菌液涂匀，再置于25℃下cc培养48小时，即可产生分生孢子。孢子悬浮液的配制及孢子萌发试验法均与水稻稻瘟病相同。
1.36番匣叶霉病;将供试菌用牙签多点接种于psa培养基平板,25℃黑暗培养一周,接种即呆扩展成直径为2-3mm菌团,并含有大量分生孢子。将菌团置于蒸馏水内，混合器振动一分钟，玻璃纤维过滤，制成孢子悬浮液。调整孢子悬浮液浓度至低倍镜下（10×15）每视野含30-50个孢子。孢子萌发试验法与水稻稻瘟病相同。
1.37水稻纹枯病、油菜菌核病：将供试菌接种于psa培养基平板，25℃培养7-10天，即可形成多数菌核。取出菌核，自来水冲除外围菌丝，进一步用0.1%升汞水浸泡一分钟，无菌水漂洗三次，阴干后置于纯＊酯平板表面，25℃培养48小时，镜检菌核萌发情况，由于一个菌核可同时产生数十个芽管，判断时以完全不产生芽管者视为有效。
1.4药剂配制及毒力测定法
采用药剂——孢子悬浮液混合法进行毒力测定。首先将高金噻酮（三代）用少量丙酮溶解，然后用含有250μg·ml－sorporl-144乳化剂孢子悬乳液稀释至设计浓度，制成一系列含有不同浓度药剂及相同浓度孢子的混合液。以250μg·ml－sorporl-144乳化剂孢子混合液做空白对照。采用1.3项描述的“载玻片悬滴法”测定不同浓度高金噻酮（三代）对供试菌孢子萌发抑制作用，按下列公式计算孢子萌发抑制率。进一步按浓度对数——抑制率机率值法统计高金噻酮（三代）对供试菌有效中浓度(ec50)。水稻纹枯病、油菜菌核病只做定性观察，不统计抑制率。
| 孢子萌发抑率(%)＝ |
对照组孢子萌发率－处理组孢子萌发率 |
×100% |
| 对照组孢子萌发率 |
２.结果与分析
高金噻酮（三代）对供试菌孢子萌发的抑制作用试验结果列于表1。结果表明，高金噻酮（三代）对多数供试菌孢了萌发均有一定程度的抑制作用，其毒力强弱因菌种而异，如表所示，高金噻酮（三代）对黄瓜霜霉病及马铃薯晚疫病孢子囊萌发抑制作用最为明显，ec50分别为12.08、21.24μg·ml-1；其次为黄瓜黑星病、稻瘟病及苹果斑点落叶病，ec50分别为38.42、43.05、52.46μg·ml-1；再其次为梨黑斑病、番茄早疫病菌及番茄叶霉病，ec50分别为89.50、16.35、119.04μg·ml-1；高金噻酮（三代）对水稻纹枯病菌、油菜菌核病菌抑制作用较弱，但在1000、500μg·ml-1；浓度下也具有100%的抑制作用，200μg·ml-1浓度下虽无抑制作用，但芽管均较下常芽管短且有分枝异常现象，100、50μg·ml-1浓度无抑制作用。
表1.高金噻酮三代对若干植物病原真菌孢子萌发的抑制作用
| 供试菌 |
(试验浓度ug·ml-1) |
有效中浓度(ec50)
(ug·ml-1) |
| 孢子萌发抑制率(%) |
| 黄瓜霜霉病 |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
12.08 |
| 85.4 |
69.2 |
50.0 |
29.3 |
18.3 |
| 马铃薯晚疫晚疫病 |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
21.24 |
| 70.1 |
55.4 |
37.0 |
22.4 |
10.0 |
| 黄瓜黑星疫 |
200 |
100 |
50 |
25 |
12.5 |
38.42 |
| 91.5 |
74.5 |
56.0 |
30.1 |
20.0 |
| 水稻稻瘟病 |
200 |
100 |
50 |
25 |
12.5 |
43.05 |
| 87.0 |
67.5 |
51.0 |
30.1 |
27.5 |
| 苹果斑点勤务员叶病 |
200 |
100 |
50 |
25 |
12.5 |
52.46 |
| 83.0 |
66.5 |
49.2 |
25.0 |
20.0 |
| 梨黑斑病 |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
89.50 |
| 89.5 |
80.1 |
60.0 |
41.4 |
20.0 |
| 番茄早疫病 |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
106.35 |
| 84.9 |
75.4 |
5105 |
35.5 |
21.0 |
| 番茄叶霉病 |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
119.04 |
| 82.2 |
70.1 |
50.9 |
31.5 |
20.9 |
| 水稻纹枯病 |
1000 |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
- |
| 无萌发 |
无萌发 |
萌发 芽管短 |
萌发 |
萌发 |
| 油菜菌核病 |
1000 |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
- |
| 无萌发 |
无萌发 |
萌发 芽管短 |
萌发 |
萌发 |
3.讨论
众所周知，植物病菌原零点菌的无性凡殖休，如分生孢子、孢子囊、菌核等在病害发生与流行过程中起着十分重要的作用。这些病原体在适宜的环境条件下可作为病害的初侵染来源，导致病害的发生，另一方面，在风、雨、流水等媒介作用下，通过这些凡殖体还可进行再侵染和远距离传播，导致病害的暴发与流行。不言而喻，抑制病原菌分生孢子（或孢子囊、菌核）萌发，将在很在程度上控制病害的发生与流行。
本研究发现，高金噻酮（三代）对供试十种植物病原真菌分生孢子、孢子囊、菌核等无性凡殖体萌发均有不同程度的抑制作用。其毒力顺序是，黄瓜霜霉病》马铃薯晚设病》黄瓜黑星病》水稻稻瘟病》苹果斑点勤务员叶病》梨黑斑病》番茄早疫病》番茄叶霉病》水稻纹枯病＝＝油菜菌核工业病。
由于本研究采用的是离体试验法。因此，高金噻酮（三代）在防治植物病害方面的有效性及程度尚需活体乃至田间试验验证。但本研究结果为高金噻酮（三代）提高杀菌剂防病效果的原理提供了新线索。这就是除药剂本身强大的渗透＊力之外，高金噻酮（三代）抑制病原菌孢子萌发，在某种程度上可能发挥了作用，对黄瓜霜霉病、马铃薯晚疫病、黄瓜黑星病、稻瘟病、苹果斑点落叶病害来说，可能发挥着十分重要的作用。
值得注意的是，高金噻酮（三代）抑制作有较强的黄瓜霜霉病、马铃薯晚疫病在真菌分类学上均属卵菌；苹果斑点落叶病、梨黑斑病、番茄早疫病均属半知菌的效链孢属，黄瓜黑星病、番茄叶霉病又归属相同的cladosporium；而对抑制作用较弱的水稻纹枯病、油菜菌核病来说，在生活上均不产生无性孢子而以菌核作为无性繁殖体。这种抑制作用强弱与真菌分类是否有某种联系需进一步研究。
从提高杀菌剂渗透性角度解释，高金噻酮（三代）可与任何杀菌剂混配并提高其防治效果。从抑制病原菌孢子萌发角度解释，由于本研究结果表明高金噻酮（三代）对多种植物病原真菌孢子都有抑制作用。因此本品与各种类型杀菌剂特别是广谱性杀菌剂混配将有助于药效的发挥。另一方面，由于高金噻酮 （三代）对供试菌孢子素养力强弱不完全相同，因此这一结果提示，高金噻酮（三代）与某些特定杀菌剂混用，将有针对性的提高对某种病害的防制效果。本研究为这种混配途径提供了素养理学依据。
南开大学元素有机化学研究所
李树正（教授）
2003年8月15日
